表觀遺傳之RNA甲基化——m6A甲基化

 

大家小長假或者放假在家,沒事應該都會刷刷電視劇,來消磨時間....啊不對,是放松身心,讓我們的身體通過娛樂獲得滿滿的能量~~ 不過呢,我們娛樂完了要開始學習啦,今天我們繼續給大家放送表觀遺傳相關的產品,前面兩集是關于表觀遺傳之DNA甲基化的,今天給大家帶來表觀遺傳之RNA甲基化。

 

表觀遺傳之RNA甲基化

 

前面給大家講了DNA甲基化,DNA甲基化是通過DNA甲基轉移酶在胞嘧啶環的第5個碳原子上共價加成甲基而產生的,從而產生5-甲基胞嘧啶(5-mC)。那么什么又是RNA甲基化呢?

 

一 RNA甲基化相關概念

 

RNA甲基化是RNA的可逆翻譯后修飾,其表觀遺傳地影響許多生物過程。它發生在不同的RNA中,包括tRNA,rRNA,mRNA,tmRNA,snRNA,snoRNA,miRNA和病毒RNA。不同的RNA-甲基轉移酶具備相應的催化策略,用于RNA甲基化。

 

RNA甲基化

 

RNA甲基化主要的修飾類型有兩三種:一種是6-甲基腺嘌呤(m6A),是在存在于真核生物的RNA分子中最常見的和豐富的甲基化修飾和占所有RNA甲基化的80%以上。它可以被稱為“第五RNA堿基”并且在調節胚胎發育和細胞命運中具有廣泛的作用。

 

6-甲基腺嘌呤(m6A)

 

另一種是5-mC,5-甲基胞嘧啶(5-mC)是一種表觀遺傳標記,通常也出現在各種RNA分子中。有證據表明,RNA胞嘧啶甲基化會影響各種生物學過程,例如RNA穩定性和mRNA翻譯。

 

5-mC

 

最后一種是m1A RNA甲基化,它普遍存在于非編碼RNA和mRNA中。m1A RNA甲基化功能,目前發現tRNA上發生多種m1A修飾,可能參與翻譯調控。

 

今天就跟大家講講RNA m6A甲基化

 

二 m6A甲基化

 

N6-甲基腺苷(m6A)-真核生物中存在的RNA分子中最常見和最豐富的甲基化修飾。 被稱為“第五個RNA堿基”的m6A RNA修飾是可逆的,高度動態的,并且可能起著與DNA甲基化和組蛋白修飾相當的重要生物學作用。

 

Epigentek可提供m6A研究相關的產品,主要有m6A RNA定量試劑盒,甲基化酶和去甲基化酶活性/抑制劑分析試劑盒,以及相關的抗體。

 

【1】m6A RNA甲基化定量檢測試劑盒

 

EpiQuik m6A RNA Methylation Quantification Kit (Colorimetric)
Cat #P-9005
EpiQuik m6A RNA Methylation Quantification Kit (Fluorometric)
Cat #P-9008
MethylFlash Urine N6-methyladenosine (m6A) Quantification Kit (Colorimetric)
Cat# P-9015
目的 ELISA樣檢測,基于吸光度的RNA定量N6-甲基腺苷 ELISA樣檢測,基于熒光定量RNA中的N6-甲基腺苷 ELISA樣檢測,基于吸收法定量尿液樣品中RNA N6-甲基腺苷
關鍵點 1.?檢測任何物種中的m6A RNA甲基化
2. 使用m6A抗體的比色ELISA樣測定
3. 檢出限低至10 pg m6A
1.?檢測任何物種中的m6A RNA甲基化
2.?使用m6A抗體的熒光法測定
3.?檢出限低至5?pg m6A
1.?檢測人類和動物尿液中的總尿m6A 水平
2.?使用m6A抗體的比色ELISA樣測定
3.?檢出限低至0.01 ng/assay well
起始材料 總RNA 總RNA 尿液
最低輸入量 50 pg 50pg 5ul
總測時長 < 4 hours < 4 hours < 4 hours
反應數 48,96 48,96 48,96
形式 96-Well Plate 96-Well Plate 96 strip-well

 

【2】Epigenase m6A甲基酶活性/抑制分析試劑盒

 

Epigenase m6A脫甲基酶活性/抑制分析試劑盒(比色)cat# P-9013 Epigenase m6A甲基化酶活性/抑制分析試劑盒(比色)cat# P-9019
目的 用于基于吸光度的核提取物或純化酶中總m6A去甲基酶活性/抑制的測量 用于基于吸光度的核提取物或純化酶中總m6A甲基化酶活性/抑制的測量
關鍵點 1.?檢測多種物種中的m6A RNA去甲基化酶活性/抑制分析檢測(哺乳動物,植物,真菌和細菌)
2.?使用m6A抗體的比色ELISA樣測定
3.?檢出限低至2ug 核提取物和50ng純化的酶
1.?檢測多種物種中的m6A RNA甲基化酶活性/抑制分析檢測(哺乳動物,植物,真菌和細菌)
2.?使用m6A抗體的比色ELISA樣測定
3.?檢出限低至2ug 核提取物和50ng純化的酶
起始材料 核提取物或者純化的酶 核提取物或者純化的酶
總測時長 <5h <4h
形式 96-Well Plate 96-Well Plate

 

【3】m6A RNA甲基化抗體

 

貨號 產品名稱 應用 宿主來源 反應性
A-1801 N6-methyladenosine (m6A) Polyclonal Antibody DB, ELISA, IF, IP, MeRIP Rabbit Broad Range, Human, Mouse
A-1802 N6-methyladenosine (m6A) Monoclonal Antibody [2H6] DB, ELISA, IF, MeRIP, NucleotideArray Rabbit Broad Range, Human, Mouse, Rat

The N6-methyladenosine (m6A)

圖左:The N6-methyladenosine (m6A) Polyclonal Antibody tested in dot blot against total RNA of Arabidopsis

圖右ELISA?performed at1:1000 dilution usingN6-methyladenosine (m6A) Polyclonal Antibody

 

The m6A rabbit monoclonal antibody

圖左:The m6A rabbit monoclonal antibody was tested in Dot Blot against N6-methyladenosine (m6A) and unmodified adenosine.

Oligomer 8 -ATAACTGG-m6ACCGAATGG

Oligomer 9 -ATAACTGGACCGAATGG

Oligomer 10 -AAAAAAAAAAAAAAAAbiotin.

圖右:U2OS cells pre-treated with BrdU were subjected to UVC irradiation incubated at 37 °C for the indicated time, and stained for N6-methyladenosine (m6A) Monoclonal Antibody. DAPI, 4’, 6-diamidino-2-phenylindole. Global UVC irradiation exceed cytoplasmic level, peaking at 2 min after irradiation and diminishing over the following 8 min.

 

【4】MeRIP & m6A-seq產品

 

通過富集存在少量m6A的部分基因組來鑒定m6A修飾。 然后通過構建文庫,為下一代測序準備這些片段。 我們獨特的方法稱為CUT&RUN RNA m6A富集(在目標下切割,并使用核酸酶富集RNA m6A進行回收),僅在抗體結合位置分離RNA片段,同時在目標下捕獲和切割。 這種簡化的過程僅需幾個小時即可將RNA提取到cDNA文庫。

 

  • p-9018 EpiQuik CUT&RUN m6A RNA Enrichment Kit :基于CUT&RUN的MeRIP可提高特異性和信號。
  • p-9016 EpiNext CUT&RUN RNA m6A-Seq Kit:基于CUT&RUN的一體式MeRIP和NGS庫準備。

 

參考文獻:

 

以上就是今天的全部內容了啦~~

 

下期預告:RNA甲基化——5mC甲基化,大家敬請期待噢~~

 

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