關于定量PCR,Cq(Ct)值的常見問題了解一下

 

定量PCR中有一個很重要的概念—Ct值.那么Ct值究竟是什么呢,今天就來給大家講一講。

 

一、Ct值的名稱

多年來,Ct值被賦予了各種各樣的名稱,今天我們就來看看Ct值都有哪些名字:

1.Ct–循環閾值

2.Cp–交點

3.TOP-分支點

4.Cq–定量循環

 

這幾個名字表達的都是一個意思。由于實時定量qPCR實驗指南建議使用Cq值來命名該值,因此,接下來的內容,我們將統一使用Cq值來表示。

 

二、Cq值的定義

實時熒光定量PCR?是將標記有熒光素的Taqman探針與模板DNA混合后,完成高溫變性,低溫復性,適溫延伸的熱循環,并遵守聚合酶鏈反應規律,與模板DNA互補配對的Taqman探針被切斷,熒光素游離于反應體系中,在特定光激發下發出熒光,隨著循環次數的增加,被擴增的目的基因片段呈指數規律增長,通過實時檢測與之對應的隨擴增而變化熒光信號強度,求得Ct值,同時利用數個已知模板濃度的標準品作對照,即可得出待測標本目的基因的拷貝數。

 

Cq值

 

1.值:

以 PCR 反應的前 15 個循環的熒光信號作為熒光本底信號,一般熒光域值定義為 3~15 個循環的熒光信號的標準偏差的 10 倍。

2.CT值:

也稱循環閾值,C代表Cycle,t代表threshold。其含義是:在PCR 循環過程中,熒光信號開始由本底進入指數增長階段的拐點所對應的循環次數。

 

三、常見問題

  1. 預混液

Cq值會隨著熒光發射的變化而變化,而熒光發射受溶液中pH值和鹽濃度的影響,因此,請確保僅使用高質量的PCR組件,如使用自制溶液,每次實驗前要檢查pH值和鹽沉淀監測

  1. 被動參比染料

反應值是FAM熒光染料與ROX參比染料的比值。假設FAM熒光不變,ROX的用量越少,反應值越高

3.模板太少–嘗試使用更多模板。

 

來源:https://bitesizebio.com/24581/what-is-a-ct-value/

 

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