彗星分析怎么做?專業彗星分析試劑盒一站式解決方案

 

由于環境因素和細胞內正常的新陳代謝過程,DNA損傷每天以每個細胞1000到100萬個分子損傷的速度發生。雖然這只占人類基因組約60億個堿基(30億個堿基對)的一小部分,但關鍵基因的未修復損傷可能會阻礙細胞發揮其功能的能力,并顯著增加癌癥的可能性。

 

彗星實驗

 

彗星實驗(Comet assay)也被稱為單細胞凝膠電泳實驗(Single cell gel electrophoresis,SCGE),是一種超靈敏的單細胞水平上檢測DNA損傷的技術,可以檢測到1.657×10-15中0.1個DNA的斷裂,甚至檢出自然光照射體外淋巴細胞1h后引起的DNA損傷。在電泳場下,損傷的細胞DNA(包含碎片和鏈斷裂)從完整的DNA中分離出來,在顯微鏡下形成典型的“彗星尾巴”形狀。DNA損傷的程度通常是通過測量彗星尾巴來目測的,也可以使用圖像分析軟件來測量各種參數。

 

彗星分析應用領域】:主要還是在細胞凋亡的研究,腫瘤/癌癥研究,毒理學研究,環境污染監測,臨床診斷與治療監測。

 

下面就由小艾為您分享一下彗星分析實驗(Comet assay)怎么做?

 

《》First,選擇專業的彗星分析試劑盒:OxiSelect™ Comet Assay Kit

 

根據您的實驗用量,可以選擇不同規格的產品:

 

產品名稱 貨號 規格 說明
Comet Assay Kits, 3-Well?(3孔玻片)
(最常用)
STA-350 15 assays(5片) 彗星分析試劑盒,3孔
STA-351 75 assays(25片)
STA-351-5 5*75 assays(5*25片)
Comet Assay Kits, 96-Well(96孔玻片)
(高通量篩選)
STA-355 96?assays(1片) 彗星分析試劑盒,9孔
STA-355-5 5*96?assays(5片)

* 每個玻片表面都經過特殊處理,一旦電泳過,即使玻片上有未使用的孔,也不能用于第二次實驗。

* 3孔和96孔玻片,均可以單獨購買,請咨詢艾美捷科技。

 

艾美捷向您推薦Comet Assay kit彗星分析試劑盒內提供了彗星分析所需的所有必需試劑,包括裂解液、彗星分析低熔點凝膠、DNA熒光染料、彗星分析玻片以及其它試劑。助您輕松完成彗星實驗分析。

 

【英文說明書】下載?后仔細閱讀哦~

*(中文版說明書,已安排翻譯中,敬請期待)

 

【2020年最新發表文章】

  • Siemionow, M. et al. (2020). Transplantation of Dystrophin Expressing Chimeric (DEC) Human Cells of Myoblast/MSC Origin Improves Function in Duchenne Muscular Dystrophy Model. Stem Cells Dev. doi: 10.1089/scd.2020.0161.
  • Lammert, C.R. et al. (2020). AIM2 inflammasome surveillance of DNA damage shapes neurodevelopment. Nature. doi: 10.1038/s41586-020-2174-3.
  • Shibayama, Y. et al. (2020). Aberrant (pro)renin receptor expression induces genomic instability in pancreatic ductal adenocarcinoma through upregulation of SMARCA5/SNF2H. Commun Biol. 3(1):724. doi: 10.1038/s42003-020-01434-x.
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《》Second, 彗星分析電泳模式選擇

 

電泳模式 檢測類型 電泳時間 說明
TBE電泳(中性電泳) 檢測單鏈雙鏈DNA的斷裂 推薦
10-15 mins
分析細胞凋亡的首選方法,可使用尾巴長度而非尾矩進行數據分析。
堿性電泳 檢測單鏈雙鏈DNA的斷裂,AP位點損傷在內的所有DNA 損傷 推薦
15-30mins
靈敏度最高!

* 實驗過程中的各類緩沖液都需要4℃預冷。

 

關于電泳電壓:以上2種電泳模式,均推薦參考您實驗室電泳槽兩極間的舉例,按照1V/cm的標準設置電壓。舉例,如果電泳槽兩極舉例是35cm,您需要使用35V的電壓來執行電泳。

實驗環境:為避免紫外線對細胞樣品造成額外損害,請在弱光條件下進行。

 

《》Third,彗星分析的典型結果樣式

 

彗星分析的典型結果樣式

如上圖,左側是健康的Jurkat細胞(未處理);右側是使用20 uM Etoposide(依托泊苷)處理4小時的Jurkat細胞。【電泳條件:堿性電泳,15mins】

 

說明書或者文獻中的結果數據是否可以作為我自己實驗的參考結果呢?

 

這是一個很好的問題,也是問得最多的問題。但與ELISA不同,Comet Assay不提供對照,因為任何Comet Assay的結果都將根據實驗條件而變化。 例如,如果電泳運行條件不同,則包含相同數量DNA損傷的細胞的尾巴大小可能會不同。 與我們的結果或其他研究人員的結果進行比較將毫無意義,因為兩者之間的條件永遠不會相同。如果您有興趣測試化合物對DNA損傷的影響,建議使所有條件在實驗之間保持一致,并使用相同的運行時間和軟件進行分析。

 

《》Fourth,彗星分析結果計算

 

通過測量細胞核遺傳物質(“彗頭”)與產生的“尾巴”之間的位移,可以量化DNA損傷。 尾矩(Tail Moment)和尾巴DNA%(Tail DNA% )是分析彗星分析結果的兩個最常見的參數。 每個樣品至少應分析50 -100個細胞。考慮到遺傳物質的遷移以及尾巴中DNA的相對數量,通常建議使用尾矩作為評估DNA損傷的指標。

 

彗星分析結果計算 Tail DNA% = 100 x Tail DNA 熒光強度/整個Cell DNA 熒光強度
尾矩(Tail Moment )可以使用以下方法之一進行測量:
1.?橄欖尾矩(Olive Tail Moment)= Tail DNA% x Tail Monent Length (頭中心與尾中心之間的長度)【左圖下】
2.?延伸尾矩(Extent Tail Moment)?= Tail DNA% x Length of Tail【左圖上】
建議使用軟件的推薦參數進行測量

 

有沒有配套的彗星實驗結果分析軟件呢?

這個還真有,小艾查閱了產品說明書,引用文獻,已經彗星分析相關的發表文章,發現有如下3種主流的軟件可用(均有文獻)。根據您的經驗和需求進行選擇。

*很遺憾,小艾也沒有親自做過此類實驗,所以每次有小伙伴求指導的時候,我們也很為難,為了避免誤導,只能盡力提供相關資料給您閱讀了。

 

軟件名稱 說明 鏈接
OpenComet 免費;是Image J軟件的一款彗星分析插件 下載頁面
CaspLab?(CASP) 免費;獨立軟件 下載頁面
Comet Assay IV 付費軟件;可試用1周 下載頁面

 

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作為一家具有高端的技術實力、先進的經營管理水平和完善的市場銷售體系的生物高科技企業,總部位于武漢光谷高新技術開發區,服務面向全國。艾美捷科技是集進口試劑、實驗室耗材銷售、技術服務與合約開發為一體的專業化高科技公司,為用戶提供專業的前沿資訊、完備的產品、整合的解決方案,及優質的物流服務。為了更好的服務客戶,公司組建了一支經驗豐富的研發團隊-艾美捷生物技術中心,進入研發生產階段,將更優質的產品推薦給國內生物領域的同仁們!

 

艾美捷科技與國內外優秀的生物試劑供應商優保持著密切的合作關系,目前已成為眾多國際知名品牌的中國總代理或一級代理,主要包括:AmyJet、AAT Bioquest、Abnova、Agrisera、Abbexa、Biovision、Biosensis、開曼生物、Caisson Labs、Cytoskeleton、CytoNiChe、Epigentek、Equitech-Bio、Hycult Biotech、ImmunoReagents、Jackson、LifeSensors、LigaTrap、Mabtech、Matreya、Norgen Biotek、Origene 、ProSpec、ProImmune、StressMarq、ScyTek 、SouthernBiotech、US Biological、Solis BioDyne等,可以在短時間內為用戶提供專業的前沿資訊、完備的產品及物流服務。

 

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