泛素化蛋白快速富集純化黑科技—TUBEs

 

泛素化是一種常見的調節蛋白的穩定性和功能的翻譯后修飾。蛋白的泛素化需要3種酶的參與,分別是泛素活化酶(ubiquitin-activating enzyme,E1)、泛素偶聯酶(ubiquitin conjugation enzyme,E2)和泛素連接酶(ubiquitin ligase,E3)。在3種酶的作用下,泛素(ubiquitin,ub)分子的C端羧基與底物蛋白賴氨酸(Lys)殘基的?氨基形成酰胺異構肽。同時,泛素也能發生泛素化修飾形成不同的泛素鏈,而不同的泛素鏈又介導不同的生物功能。泛素化修飾不僅參與底物蛋白的26S蛋白酶體降解過程,還參與基因轉錄、細胞周期、DNA損傷和免疫應激等生物過程。大規模富集泛素聚合物是研究泛素化系統的關鍵技術。傳統的富集泛素化蛋白的常用手段是標簽富集或者高親和力抗體富集,這種基于抗體的泛素蛋白質組學對于大規模泛素化系統的研究是非常昂貴的,而且,目前市面上大多數供應商出售的泛素抗體是非選擇性的,無法滿足研究學者的多樣需求。

 

泛素化蛋白快速富集純化

 

泛素結合結構域(ubiquitin-binding domains,UBD)是一種可識別和結合泛素化修飾的蛋白小模塊。根據結構域的不同可將UBD分為20個家族,這些UBD對泛素的親和力不等(2~500umol),且存在泛素鏈的偏好性。UBD結合下的泛素化蛋白在胰蛋白酶的作用下,泛素化底物上的泛素化位點Lys由于泛素化產生一個帶2個甘氨酸標簽的分枝狀漏切肽段,這2個甘氨酸標簽是由于修飾的泛素分子的C末端通過異肽鍵與泛素化位點的Lys結合,經過胰蛋白酶消化后保留的殘基。產生的信號肽在質譜信號中會產生一個114.043Da的質量躍遷,結合漏切的Lys位點,合稱為GG-K信號肽,通過該信號肽結合數據庫搜索引擎可實現對泛素化底物的鑒定。這也是高精度質譜技術實現泛素化底物鑒定的基礎。

 

基于UBD對泛素的高親和力,泛素研究專家LifeSensors已開發出利用串聯泛素結合實體(Tandem Ubiquitin Binding Entities,TUBE)從細胞和組織裂解液中特異性分離富集泛素化蛋白的技術。TUBEs由多個UBDs串聯構成,對泛素鏈親和性極高,而且,TUBEs通過與泛素鏈的結合可以保護蛋白質不被去泛素化,同時避免靶蛋白發生蛋白酶體介導的降解,為研究泛素化蛋白質組學提供了很好的工具。

 

除了研發和生產可與所有類型的多聚泛素鏈結合的TUBE(pan-TUBE)之外,LifeSensors還開發了可選擇性地與K48或K63或線性(M1)多泛素化蛋白結合的鏈特異性TUBE。

 

多泛素化蛋白結合的鏈特異性TUBE

 

TUBE產品優勢

  1. 可快速有效的實現泛素化蛋白的富集和純化
  2. 比單個UBA結構域的親和力高1000倍
  3. 與泛素抗體相比有更高的特異性和親和力
  4. 保護蛋白質不被去泛素化,同時可避免靶蛋白發生蛋白酶體介導的降解

 

TUBE

 

pan-TUBE——可與所有類型的多聚泛素鏈結合

標簽類型 貨號 名稱
磁珠(Magnetic) UM401M TUBE 1 (Magnetic Beads)
UM402M TUBE 2 (Magnetic Beads)
瓊脂糖珠(Agarose) UM401 TUBE 1 (Agarose)
UM402 TUBE 2 (Agarose)
生物素 UM301 TUBE 1 (Biotin)
UM302 TUBE 2 (Biotin)
GST UM101 TUBE 1 (GST)
His6 UM201 TUBE 1 (His6)
HRP UM312 TUBE 2 (HRP)
熒光(Fluorescein/Tamra) UM502F TUBE 2 (Fluorescein)
UM502T TUBE 2 (TAMRA)
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Selective TUBEs——與M1-線性多聚泛素鏈特異性結合

標簽類型 貨號 名稱
His6 UM206 M1 TUBE (His6)
生物素 UM306 M1 TUBE (Biotin)
FLAG UM606 M1 TUBE (FLAG)

 

Selective TUBEs——與K48-多聚泛素鏈特異性結合

標簽類型 貨號 名稱
磁珠(Magnetic) UM407M K48 TUBE HF (Magnetic Beads)
生物素 UM307 K48 TUBE HF (Biotin)
FLAG UM607 K48 TUBE HF (FLAG)
His6 UM207: K48 TUBE HF (His6)
GST UM107 K48 TUBE HF (GST)
熒光(Fluorescein/Tamra) UM507F K48 TUBE HF (Fluorescein)
UM507T K48 TUBE HF (TAMRA)

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Selective TUBEs——與K63-多聚泛素鏈特異性結合

標簽類型 貨號 名稱
磁珠(Magnetic) UM404M K63 TUBE (Magnetic Beads)
生物素 UM304 K63 TUBE (Biotin)
FLAG UM604 K63 TUBE (FLAG)
熒光(Fluorescein/Tamra) UM504F K63 TUBE (Fluorescein)
UM504T K63 TUBE (TAMRA)

 

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